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當(dāng)前位置:上海紀寧實業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>實驗抗原攝取對ELISA試劑盒的作用
ELISA試劑盒任何血清學(xué)實驗都依賴于具有價、特異性強的抗血清的發(fā)生,而抗血清的制備離不開抗原的搜集、保存和提取。采回的害蟲饑餓24h后,將等體積的磷酸緩沖液(PBS)滴入備用的害蟲中,研磨后參加過量的PBS(PH=7.4),在4℃下拌和24h,然后以4000-5000r/min的速度離心20h,別離上清液。沉渣用上法重復(fù)抽提一次。
將兩次所得的上清液混合后,置于4℃下替換屢次冷鹽水透析24h或48h。透析液用冰凍枯燥法或反透析法進行濃縮。濃縮液用紫外分光光度計測定蛋白質(zhì)含量,得到適當(dāng)濃度的蛋白質(zhì)溶液即位抗原。
ELISA試劑盒抽提過程中應(yīng)留意:①一切的處理都需在低溫(4℃)下進行,以防蛋白質(zhì)變性:②若抗原溶液需保存較長的時刻,則需加防腐劑(如NaN3)或在凍干狀態(tài)下保存:③為制備特異性強的抗血清,抗原可用規(guī)范的生化技能進行純化:④如一次不能搜集滿足的抗原,可將每次的蟲體保存在-20℃或?qū)⒖乖瓋龈芍钡蕉鸭瘽M足的量。
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