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勁馬為您總結(jié)小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法

2021-3-16  閱讀(1768)

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平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細(xì)胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨(dú)立的器官,而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素(肌層)。平滑肌細(xì)胞互相連接,形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官;在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運(yùn)動和變形,也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負(fù)荷而保持原有的形狀。


小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關(guān).如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時,可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,表型也發(fā)生改變,由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型,并分泌多種與細(xì)胞因子;而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。


小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)

1.取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中
2.剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中
3.在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管
4.用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎
5.加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化
6.第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h
7.待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,充分吹打
8.過100目篩網(wǎng),收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清
9.用*培養(yǎng)基重懸沉淀,鋪瓶。

 

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