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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：436發(fā)布時間：2011-9-7
一、從土壤中分離放線菌
1.制作高氏一號培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。
2.稱取土壤10克，放入裝有100毫升無菌水的錐形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制細菌生長。振蕩10分鐘，制成10-1菌懸液。按照連續(xù)稀釋分離法，進一步制成10-3菌懸液。
3.用移液管吸取0.1毫升10-3菌懸液，注入平板培養(yǎng)基上，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻涂抹在整個培養(yǎng)基上。然后將培養(yǎng)皿倒置于25-30℃溫箱中，培養(yǎng)7-10天，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)微生物菌落。如果菌落的硬度較大，干燥致密，且與基質(zhì)緊密結(jié)合，不易被針挑起，這就是放線菌菌落。
4.挑取放線菌菌落，接種于斜面培養(yǎng)基上。
二、從土壤中分離霉菌
1.制作豆芽汗葡萄糖培養(yǎng)基，并添加80%乳酸數(shù)滴，以抑制細菌生長。將培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。
2.稱取10克土壤，按上述分離放線菌的方法制成10-4或10-5的菌懸液。
3.取0.1毫升菌懸液注入培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂抹均勻。然后將培養(yǎng)皿倒置于25-30℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)3-4天。培養(yǎng)基上會出現(xiàn)微生物菌落。霉菌菌落常長成絨狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，可根據(jù)這一特征尋找霉菌菌落。
4.挑取培養(yǎng)皿內(nèi)的霉菌菌落接種于斜面培養(yǎng)基上
三、從飲水中分離大腸桿菌
1.制作伊紅美藍培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。
2.用滅過菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1:10稀釋。
3.取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍培養(yǎng)基上。用平板劃線分離法進行分離。
4.將劃線后的培養(yǎng)皿倒置37℃溫箱中培養(yǎng)18-24小時。培養(yǎng)基中會出現(xiàn)大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發(fā)金屬光澤。
5.將菌落接種于斜面培養(yǎng)基上（由營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制成）。
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