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上海酶聯(lián)生物研究所


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技術(shù)文章

單克隆抗體技術(shù)原理

閱讀:321發(fā)布時間:2011-12-2

B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去,因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,再進一步克隆化,這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力,又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞的能力,將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的價、單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。
制備單克隆抗體的方法是用缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤細胞變異株與脾臟的B細胞融合。采用HAT選擇性培養(yǎng)基(培養(yǎng)基中加次黃嘌呤HyPoxanthine H,氨基喋呤Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T),在這種選擇性培養(yǎng)基中,由于變異的瘤細胞不具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶或胸腺嘧啶核苷激酶,所以不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。而只能利用谷酰胺與尿核苷酸單磷酸合成DNA,這一途徑又被氨基喋呤所阻斷,所以未融合的瘤細胞不可避免也要死亡。融合的雜交瘤細胞由于脾淋巴細胞具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶,可以通過次黃嘌呤合成DNA,克服氨基喋呤的阻斷,因此雜交瘤細胞大量繁殖而被篩選出來。B淋巴細胞在一般培養(yǎng)基中不能長期生長,一般于二周內(nèi)均死亡。
單克隆抗體與常規(guī)抗體相比有如下優(yōu)點:
①單一特異性,與一個抗原決定簇反應(yīng);
② 可重復性,能夠提供*一樣的抗體制劑;
③一經(jīng)制出,可無*地供應(yīng);
④生產(chǎn)單克隆抗體,不一定需要純的抗原;
⑤能查出混合物中存在的用常規(guī)方法查不出的少量成分。


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