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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：526發(fā)布時間：2011-12-21
定量的目的是測定目的基因在樣本中的分子數(shù)目，即通常所說的拷貝數(shù)。相對定量的目的是測定目的基因在兩個或多個樣本中的含量的相對比例，而不需要知道它們在每個樣本中的拷貝數(shù)。舉例來說，如果研究項目中包括處理過的和未經(jīng)處理的對照樣本，通?？梢詫⑽唇?jīng)處理的樣本為基準，規(guī)定其目的基因濃度為 100%，將經(jīng)處理的樣本的定量結(jié)果除以對照樣品的定量結(jié)果，就可以計算各個處理樣本的基因含量相對于未處理樣品的百分比。
定量實驗必須使用已知拷貝數(shù)的標準品，必須做標準曲線。相對定量可以做標準曲線，也可以不做標準曲線。
相對定量實驗有兩種方法：標準曲線法和CT值比較法。如果使用標準曲線法，可以使用標準品，也可以使用相對標準品，而且相對標準品在實驗操作上更為簡便易行。相對標準品是只知道樣品中DNA或RNA的稀釋比例而不需要知道其分子數(shù)目的標準品，典型的做法是將一個已知pg數(shù)的樣品做一系列梯度稀釋。
CT值比較法是利用CT值與起始DNA濃度的對數(shù)成反比的數(shù)學關(guān)系，來計算不同樣本之間的相對百分比，定量的數(shù)據(jù)易于理解，但是標準品的制備和測定其DNA含量比較困難。有許多商業(yè)性的標準品試劑盒供選購，可以解決這種困難。相對定量的標準品容易在實驗室里自己制備，但是數(shù)據(jù)處理比較麻煩，對實驗數(shù)據(jù)的解釋有一定難度。
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