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上海通蔚生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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ELISA檢測試劑盒的檢測速度和靈敏度

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    ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。ELISA檢測試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。

    此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。因?yàn)槊傅拇呋屎芨?,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,ELISA檢測試劑盒酶標(biāo)記的抗原或抗體既留存其免疫學(xué)活性,又留存酶的活性。在選購酶標(biāo)儀的時(shí)候,我們會(huì)首先面臨一個(gè)選擇,濾光片還是光柵?酶標(biāo)儀主要分為濾光片型和光柵型,分別以兩種不同方式生成特定波長的激發(fā)光,一種是通過濾光片,一種是通過單色器(包括光柵和棱鏡)。對(duì)于我們使用者來說,這兩種酶標(biāo)儀究竟有何區(qū)別呢?

    因此濾光片型酶標(biāo)儀一般要比光柵型酶標(biāo)儀靈敏。此外,濾光片能夠?qū)崿F(xiàn)快速的波長轉(zhuǎn)換,很適合離子通道比率分析以及雙信號(hào)快速動(dòng)力學(xué)分析等。濾光片的配置決定了酶標(biāo)儀所能使用的波長,我們更改實(shí)驗(yàn)波長就是在切換濾光片。ELISA檢測試劑盒濾光片型酶標(biāo)儀一般要比光柵型便宜一些,如果我們需要的波長比較固定,對(duì)靈敏度又有較高要求,那么濾光片型酶標(biāo)儀無疑是*選擇。若是日后想要應(yīng)用其他波長,還需另外購買濾光片,要是需添置的波長多就不大合算了。所以在我們出手之前一定要先想好未來可能進(jìn)行的各項(xiàng)研究,謀定而后動(dòng)。
     目前市面上的光柵型酶標(biāo)儀其實(shí)比濾光片型更為普遍,這是因?yàn)楣鈻趴梢造`活設(shè)置波長,就算臨時(shí)開展新研究也不用專門去買濾光片。而且如果我們要用未知染料進(jìn)行檢測,或是需要自定義波長和光譜掃描,就只能選光柵型酶標(biāo)儀。此外,光柵在近紫外區(qū)的檢測效率也更高(如色氨酸熒光檢測)。zui先推出光柵型酶標(biāo)儀的是MD公司(Molecular Devices),ELISA檢測試劑盒MD酶標(biāo)儀采用一個(gè)光柵和一個(gè)濾片濾光的單光柵系統(tǒng)。后來又出現(xiàn)了兩個(gè)光柵組成的濾光系統(tǒng),例如PE、TECAN、Thermo、BioTek等公司的一些產(chǎn)品,這類系統(tǒng)由于激發(fā)和發(fā)射各用兩個(gè)光柵也被稱為四光柵系統(tǒng)。
總的來說,如果實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用很多需要多種波長,那么選擇靈活方便的光柵型酶標(biāo)儀準(zhǔn)沒錯(cuò)。若是應(yīng)用比較單一但對(duì)靈敏度要求高,物美價(jià)廉的濾光片型酶標(biāo)儀就相當(dāng)貼心。此外,還有BioTek公司的Hybrid Technology系統(tǒng),該系統(tǒng)將濾光片和單色器組合起來,想用濾光片時(shí)選濾光片,想用光柵時(shí)選光柵,就是這么簡單。
適合的才是的
    不論我們買什么,適合自己的才是的,選擇酶標(biāo)儀時(shí)也是如此。酶標(biāo)儀性能指標(biāo)包括測定波長范圍、濾光片配置、檢測速度、吸光度范圍、線性范圍、分辨率、準(zhǔn)確度、精密度等。
對(duì)于一般生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室來說,酶標(biāo)儀主要可用于基因表達(dá)、信號(hào)傳導(dǎo)、ELISA、蛋白和核酸定量、細(xì)胞活性分析和免疫分析。如果要進(jìn)行細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),ELISA檢測試劑盒酶標(biāo)儀一般要能夠底部讀取、微孔板掃描、并支持孵育和搖晃。而要做高通量篩選的實(shí)驗(yàn)室,就需要考慮到。高通量篩選可能涉及到特殊篩選溶液、更低的檢測限以及大量微孔板。在選擇酶標(biāo)儀時(shí)除了要關(guān)注可靠性、靈敏度和一致性以外,能否對(duì)微孔板所有孔進(jìn)行同時(shí)檢測也是不可忽視的考量因素。

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