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規(guī)格	1×106cells/T25培養(yǎng)瓶	種屬	人
貨號(hào)	CS-X2399	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣

產(chǎn)品信息：

貨號(hào)	CS-X2399	種屬	種屬人
生長(zhǎng)特性	生長(zhǎng)特性貼壁/懸浮	細(xì)胞形態(tài)	細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣
溫度	液氮	培養(yǎng)條件:	氣相：空氣，95%；CO2，5%
鑒定	STR鑒定正確	生長(zhǎng)培養(yǎng)基	生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

NCI-H446 H446 (人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)

商品介紹：

產(chǎn)品名稱：NCI-H446 H446 (人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)
種屬人

年齡（性別）男；61歲

組織來(lái)源肺；轉(zhuǎn)移灶：肋膜滲出癌；小細(xì)胞肺癌

生長(zhǎng)特性貼壁/懸浮

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述NCI-H446細(xì)胞是從一位小細(xì)胞肺癌患者的胸水中建立的，NCI-H446細(xì)胞的原始形態(tài)并不具有小細(xì)胞肺癌特征。NCI-H446細(xì)胞是小細(xì)胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種，表達(dá)神經(jīng)元有的烯醇酶和腦部肌suan激酶同功酶。NCI-H446細(xì)胞內(nèi)左旋多ba脫羧酶、蠶su、抗利尿激su、催產(chǎn)su或胃泌激su釋放肽未達(dá)到可檢測(cè)水平。C-myc DNA序列擴(kuò)增約20倍，c-myc RNA比正常細(xì)胞增加15倍。最初，傳代培養(yǎng)基用RPMI-1640(含5%胎牛血清、10nM氫化可的song、0.005mg/ml胰島su、0.01mg/ml鐵傳遞蛋白、10nM 17-β-雌二醇、30nM亞硒suan鈉)。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

細(xì)胞保存方法：

（一）細(xì)胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；

8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

NCI-H446 H446 (人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)

注意事項(xiàng)：

1）、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì)，應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。

2）、細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無(wú)，而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。

3）、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，無(wú)菌且無(wú)色(以0. 22micron FGLP Telflon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

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操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動(dòng)試管，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。