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伊萊博生物科技(上海)有限公司
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更新時間:2025-07-24 16:40:45瀏覽次數(shù):83
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一、單精子注射實驗技術(shù)定義與核心原理
單精子注射(ICSI) 是一種顯微操作輔助生殖技術(shù),通過物理方式將單個精子直接注入成熟卵母細胞的胞質(zhì)內(nèi),強制完成受精過程。其核心原理包括:
繞過自然受精屏障:
規(guī)避精子獲能、頂體反應(yīng)及卵膜穿透等自然步驟,直接解決精子活力低下、形態(tài)異?;蚵涯讣毎ご┩刚系K等問題。
精卵強制融合:
通過顯wei針機械刺激卵母細胞,激活鈣振蕩信號通路,啟動胚胎發(fā)育。
遺傳物質(zhì)高效利用:
單精子即可完成受精,顯著節(jié)省珍貴遺傳資源(如瀕危物種精液、死亡個體冷凍樣本)。
生物學(xué)意義:ICSI不僅是受精失?。ㄈ缍嗑肼选⒕訜o能)的補救方案,更是研究受精機制與胚胎發(fā)育的關(guān)鍵實驗?zāi)P?/span>。
二、單精子注射實驗標準化操作流程(以馬為例)
1. 卵母細胞采集與成熟
步驟 | 技術(shù)要點 | 成功率 |
---|---|---|
活體卵巢穿刺(OPU) | 超聲引導(dǎo)經(jīng)陰道穿刺卵泡,吸取卵丘-卵母復(fù)合體(COCs) | 60–70%獲卵率 |
體外成熟培養(yǎng)(IVM) | 未成熟卵子在含激素(FSH/LH)培養(yǎng)基中培養(yǎng)24–36小時至MII期 | 50–60%成熟率 |
2. 精子處理與注射
精子來源:新鮮精液、冷凍復(fù)蘇精液、附睪穿刺精子甚至死精(需化學(xué)激活)。
注射關(guān)鍵操作:
精子制動:顯微zhen機械損傷尾部,增強受精能力。
顯微注射:固定卵子→穿刺透明帶→注入精子(需<0.5 pL胞質(zhì)抽吸驗證)。
3. 胚胎培養(yǎng)與移植
體外培養(yǎng):受精卵在KSOM/SOF培養(yǎng)基中培養(yǎng)至囊胚(約7–10天)。
移植策略:
手術(shù)移植:早期胚胎植入受體輸卵管(高妊娠率但侵入性強)。
非手術(shù)移植:囊胚期經(jīng)宮頸植入子宮(主流趨勢)。