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伴肌動蛋白抗體,Anti-Nebulin抗體的效價鑒定 不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴散試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗9ELISA)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在 IC50時的濃度,并按下列公式計算交叉反應(yīng)率。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0,即該血清的特異性較好。
抗體的親和力 是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在 108 ~1010 /mol,也有多達 1014 /mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
免疫用的動物選擇適齡的健康雄性動物,雌性動物特別是妊娠動物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時甚至不產(chǎn)生抗體。由于對免疫應(yīng)答的個別差異,免疫時應(yīng)同時選用數(shù)只動物進行免疫。 抗原是多種多樣的,而且千差萬別。就其化學成分而言,有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有*抗原和不*抗原。為了獲得較好的抗血清,是選用蛋白質(zhì)抗原,如要制備用于篩選細菌表達的 cDNA 文庫或免疫印跡的抗血清,選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原,其免疫原性的強弱均不相同,這種免疫原性的強弱取決于抗原的分子量、化學活性基團、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等。
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