熒光素標(biāo)記DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體IgG，Anti-TOPOⅡα/DNA TPⅡα /FITC

解決陰性染色的問題非常簡(jiǎn)單，就是設(shè)立“陽(yáng)性對(duì)照”。如果陽(yáng)性對(duì)照有了表達(dá)，說明染色的全過程和所有試劑都沒有問題。如果此時(shí)測(cè)試片仍為陰性，便是真實(shí)的陰性，說明組織或細(xì)胞沒有相應(yīng)的抗原表達(dá)。反之，如果陽(yáng)性對(duì)照沒有著色，表明染色過程中某個(gè)或某些步驟出了問題或試劑出了問題。應(yīng)一一尋找原因。陽(yáng)性對(duì)照包括兩種，一種稱為“自身對(duì)照”或“內(nèi)部對(duì)照”，這是指在測(cè)試的切片中本身就存在已知的抗原，如正常淋巴結(jié)中存在T和B細(xì)胞抗原，CD20或CD3都應(yīng)該有表達(dá)。自身對(duì)照是一種比較理想的對(duì)照，對(duì)照和測(cè)試組織或細(xì)胞都在同一張切片中，都處于相同的試驗(yàn)條件下，結(jié)果更可靠也更具有可比性。在選擇自身對(duì)照片時(shí)選擇既有病變組織同時(shí)又有正常組織的部分，這樣有利于對(duì)比。另一種稱為“外部對(duì)照”，有時(shí)在測(cè)試的切片中不存在已知的抗原，如在胃的標(biāo)本中懷疑是惡性黑色素瘤，需要用HMB45或Mart-1來檢測(cè)，在正常的胃組織中本身不存在相關(guān)的抗原，如果病變出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果，尚能提示是惡黑，但是如果出現(xiàn)陰性結(jié)果，就無法確定是本身組織中不含黑色素瘤抗原，還是技術(shù)問題。因此，應(yīng)另外設(shè)立一個(gè)已知的陽(yáng)性對(duì)照。這種在測(cè)試組織之外的陽(yáng)性對(duì)照稱為“外部對(duì)照”。在實(shí)際工作中需要設(shè)立外部對(duì)照的情況很多，如果每一種抗體都要選不同的陽(yáng)性對(duì)照，工作量會(huì)很大。為了解決這個(gè)問題，目前國(guó)內(nèi)外有單位將多種不同組織集成在一起，制成多組織切片、“臘腸”“春卷”切片、組織芯片等，其連續(xù)切片儲(chǔ)備待用，需要時(shí)取出一張便可作為陽(yáng)性對(duì)照。另外，比較簡(jiǎn)單的方法，是采用闌尾作為陽(yáng)性對(duì)照，因?yàn)榕c人體其它組織器官比較闌尾包含的組織種類較多，如有上皮、淋巴組織、平滑肌、間質(zhì)、神經(jīng)、血管、間皮等。一張闌尾切片可以檢測(cè)大多數(shù)常用的抗體。 
設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照是病理醫(yī)生的任務(wù)或責(zé)任，而不是技術(shù)員的責(zé)任。病理醫(yī)生觀察了HE切片，了解切片中是否有自身對(duì)照，如果沒有，就應(yīng)告訴技術(shù)員采用陽(yáng)性對(duì)照。因此，病理醫(yī)生在免疫組化中的作用是不可忽視的。 
抗體未覆蓋上測(cè)試組織：當(dāng)多塊散開的小組織染色時(shí)，可能漏掉某塊組織染色。