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滅活內源性酶及封閉內源性*

時間：2013-12-26閱讀：648
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 在生物體組織內均含有一定量的內源性酶和內源性*，如富含血細胞的組織標本有大量具有活性的過氧化物酶，肝、脾、腎、腦及胚胎組織中富含*。如采用過氧化物酶檢測系統(tǒng)或堿性磷酸酶和NBT/BCIP顯色系統(tǒng)進行免疫組織化學染色時．酶的作用是催化底物，使顯色劑顯色，而組織中的內源性酶同樣也能催化底物，使其顯色，這就影響免疫組織化學染色的特異性。在使用親和素試劑的免疫 組織化學染色中，內源性*易結合親和素，形成親和素一*復合物，導致假陽性。所以在染色之前應設法將組織內的內源性酶滅活或將內源性*封閉，以保證染色的特異性。

 
    (1)滅活內源性過氧化物 酶：將組織在3％甲醇―H2 O2 (3ml純甲醇中加入30％H2 02 0．3ml，現(xiàn)用現(xiàn)配)中室溫浸泡10分鐘，繼而用PBS沖洗3次，每次5分鐘。
 
    (2)滅活堿性磷酸酶：zui常用的方法是將左旋咪唑(以每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH為7．6～8．2，可除去大部分內源性堿性磷酸酶，對于仍能干擾染色的酸性磷酸酶可用0．05mol/L酒石酸抑制。
 
    (3)封閉內源性*：將組織切片用0．0l％親和素溶液室溫處理10～20分鐘，使其結合位點飽和，以消除內源性*的活性。也可購買*阻斷劑試劑盒，其中A液為親和素．B液為*。使用時加A液l滴，室溫10分鐘，PBS沖洗3次，每次2分鐘；加B液1滴。室溫10分鐘．PBS沖洗3次，每次2分鐘。

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