1、將無菌棉試子蘸取無菌生理鹽水，在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處5cm×5cm面積上，有順序地均勻涂抹3次（一雙鞋鞋為一份樣品）后，用滅菌剪刀將棉試子手執(zhí)部分剪斷，將棉試子放入10mL裝有玻璃珠的無菌鹽水管中。

2、將盛有棉試子的鹽水管在手心用力震蕩100次，再用帶橡皮乳頭的1mL滅菌吸管反復吹吸50次，使霉孢子充分散開。此液為1：10稀釋液。

3、用滅菌吸管吸取1:10檢液2ML，分別注入到2個滅菌平皿內,每皿1ML。令取1ML注入9ML加有玻璃珠的滅菌鹽水管中，換一支1ML滅菌吸管吸吹5次，此液1:100稀釋液。

4、按上述操作順序作10倍稀釋,每稀釋一次,換一支1ML滅菌吸管,根據樣品的污染情況,選擇3個合適的稀釋度。

  5、將溶化并冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基注入滅菌的平皿中,待瓊脂凝固后,倒置于25～28 ℃溫箱中，3天后開始觀察，共培養(yǎng)觀察一周。

  6、計算方法:通常選擇菌落數在30～100之間的平皿進行計數,同稀釋度的兩個平皿的菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每毫升檢樣中所含真菌數。若有兩個稀釋度的菌落數皆在規(guī)定范圍之間或三個稀釋度皆不在此范圍時,應參照細菌總數的報告方式報告。

7、結果報告：              m=n×k

     m-真菌菌落數，cfu/50cm2（一雙拖鞋涂抹面積）

           n-每皿的平均真菌菌落數；

           k-稀釋倍數；