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伊萊博生物科技(上海)有限公司
主營產(chǎn)品: 動(dòng)物行為學(xué)檢測,大中小型動(dòng)物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù) |
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參考價(jià) | ¥ 1 |
訂貨量 | 1件 |
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- 所在地 上海市
更新時(shí)間:2025-08-02 12:02:40瀏覽次數(shù):59
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一、系統(tǒng)定義與生物學(xué)起源
CRISPR/Cas12a(原稱 Cpf1)屬于 Class 2 Type V 型 CRISPR 系統(tǒng),是細(xì)菌與古菌的適應(yīng)性免疫機(jī)制,用于識(shí)別并切割入侵的病毒或質(zhì)粒 DNA。與 Cas9 相比,其du特的工作模式使其在基因編輯、分子檢測及多基因調(diào)控中展現(xiàn)顯著優(yōu)勢。
二、核心分子機(jī)制與技術(shù)特性
(一)作用流程

(二)關(guān)鍵特性對比(Cas12a vs Cas9)
參數(shù) | CRISPR/Cas12a | CRISPR/Cas9 |
---|---|---|
蛋白大小 | 1,200-1,300 氨基酸(更?。?/td> | 1,000-1,600 氨基酸 |
RNA 依賴 | 僅需 crRNA(無 tracrRNA) | 需 crRNA + tracrRNA 或嵌合 sgRNA |
crRNA 加工 | 自主 RNase 活性(內(nèi)置加工能力) | 依賴宿主 RNase III 和 tracrRNA |
切割末端類型 | 黏性末端(5' 突出) | 平末端 |
PAM 識(shí)別序列 | 5'-TTTN/TTTV-3'(富含 T) | 5'-NGG-3'(富含 G) |
核酸酶結(jié)構(gòu)域 | 單一 RuvC 結(jié)構(gòu)域 | HNH + RuvC 雙結(jié)構(gòu)域 |
反式切割活性 | 有(可非特異性切割 ssDNA) | 無 |
注:
V 表示 A/C/G(非 T),如 5'-TTTA/TTTC/TTTG-3'。
黏性末端 更易觸發(fā)同源重組修復(fù)(HDR),提升精準(zhǔn)編輯效率。
三、優(yōu)勢與應(yīng)用場景
(一)技術(shù)優(yōu)勢
多基因編輯高效性:
單一 crRNA 陣列可同時(shí)靶向多個(gè)基因,無需重復(fù)構(gòu)建 tracrRNA,適用于復(fù)雜通路調(diào)控。
AT 富集基因組適配性:
對富含 AT 的基因組(如植物、寄生蟲)編輯效率顯著高于 Cas9。
低脫靶風(fēng)險(xiǎn):
嚴(yán)格依賴 PAM 激活,且反式切割活性可關(guān)閉,全基因組脫靶率低于 Cas9。
遞送便捷性:
蛋白更小,更易包裝進(jìn) AAV 等病毒載體,適合體內(nèi)基因治療。
(二)核心應(yīng)用領(lǐng)域
應(yīng)用方向 | 案例 | 優(yōu)勢體現(xiàn) |
---|---|---|
多基因敲除 | 玉米中同步編輯 3 個(gè)抗旱基因,編輯效率 >60% | crRNA 陣列簡化設(shè)計(jì) |
精準(zhǔn)基因插入 | 利用黏性末端增強(qiáng) HDR,實(shí)現(xiàn)人源 FIX 凝血yin子基因定點(diǎn)修復(fù) | 高保真修復(fù) |
分子診斷 | 結(jié)合反式切割活性開發(fā) 核酸檢測(CRISPR-DETECT) | 高靈敏度、無需 PCR 擴(kuò)增 |
抗病毒研究 | 家蠶中編輯 BmNPV 病毒受體基因,抗病毒效率較 Cas9 提升 40% | 高效切割 AT 富集區(qū) |
基因治療載體優(yōu)化 | Cas12b(更小變體)脫靶率較 Cas9 降低 50%,適合臨床 | 高安全性遞送 |